过氧化氢（H2O2）测试盒 100管/96样

本品用于科研实验,不用于临床。

生化试剂盒可以检测的样本类型有哪些?
  生化试剂盒的实验原理是基于化学反应,理论上是不受生物种属及样本类型的限制。生化试剂盒样本检测通常只分样本类型,不分种属。但是某些指标在不同种属或类型样本中的提取方式不同。因此,具体情况请参见说明书或与技术支持联系确认。
生化试剂盒样本检测的一般要求:
1)于生化检测而言,样本无溶血、脂血、的现象。组织样本需将血液洗净擦干后再进行称重处理。
2)样本处理后尽快进行检测,且保存于冰盒之上,待测。
求
3)样本需澄清,若不澄清,需离心后取上清进行检测(特殊指标除外)。
4)样本值应在试剂盒线性范围内,若超过线性范围,需稀释后再进行检测,若低于检测范围,需增加样本浓度后进行检测。

过氧化氢（H2O2）测试盒 100管/96样

        一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各种不同的形状。各种仪器分析法经过适当的改进后，可以直接应用在微量分析上。

超微量分析由于样品太少，因此必须在显微镜下进行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些仪器分析(如电位滴定，电解和电导等)，也可用来作为超微量分析之用。

        微量分析在研究工作中用得极广。尤其是在进行稀有元素化学研究时，在解决地球化学同题，研究某些稀有元素矿物粗成及其分配规律时，往往只能得到极少的样品，在这选种情况下一般的常量分析法是无法进行分析的，只有靠微量分析法来解决。另外，在生物化学中微量分析的应用更是普遍

过氧化氢（H2O2）测试盒 100管/96样

本品用于科研实验,不用于临床。

测定意义:
辅酶NAD(H)存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循环(TCA)的主要氢受体,生成的 NADH 经呼吸电子链(ETC)传递把电子交给氧,在合成 ATP 的同时,形成大量的 ROS,同时 NADH 再生为 NAD+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一完成。NAD(H)含量和 NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和 TCA 循环的强弱。较高的NAD(H)及 NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高,处于过氧化状态。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和 TCA 循环。另外,NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。
测定原理:
分别用酸性和碱性提取液提取样品中 NAD+和 NADH,NADH 通过 PMS 的递氢作用,还原氧化型噻唑蓝(MTT)为甲瓒,在 570nm 下检测吸光值;而 NAD+可被乙醇脱氢酶还原为 NADH,进一步采用 MTT 还原法检测。
需自备的仪器和用品:
酶标仪、台式离心机、移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
酸性提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;
碱性提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 10 mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存;
试剂三:粉剂×1 瓶,-20 ℃保存,用时加入 3mL 蒸馏水,混匀,用不完的试剂 4℃保存一周;
试剂四:粉剂×1 瓶,4 ℃保存,用时加入 3mL 蒸馏水,混匀,用不完的试剂 4℃保存一周;
试剂五:液体 3.6mL×1 瓶,4 ℃保存;
试剂六:液体 30mL×1 瓶,4 ℃保存;
试剂七:液体 50mL×1 瓶,4 ℃保存。
NAD+和 NADH 的提取:
离心 5min,弃上清,沉淀中加入:
混匀,取 200μL 转移至微量石英比色皿或 96 孔板中,570nm 下读取对照吸光值 A1 和测定管吸光值 A2,计算△A=A2-A1。

注意事项:
1、如果一次性测定样本数较多,可将试剂一、二、三和四按比例配成混合液。
2、对照管和测定管的测定步骤的区别:对照管加完试剂一、二、三、四和五后必须马上加试剂六;测定管加完试剂一、二、三、四和五后必须反应 20min 后再加试剂六。
3、反应过程中注意避光。
4、若 NAD+测定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH 测定中△A(A2-A1)≤0.0222,说明样本中辅酶含量较低,已低于检测限,可做如下调整:(1)将测定管避光静置时间 20min 延长到 60min;(2)在提取阶段增加取样量,即取 0.2g 样本或 0.2mL 样本加入 1mL 提取液。
5、由于每一个测定管需要设一个对照管,本试剂盒 100 管测 48 个 NAD+或 NADH.
NAD+和 NADH 含量的计算:
(一) NAD+含量的计算
标准条件下的回归曲线为 y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中 y 为△A,x 为 NAD+浓度 nmol/mL
1、血清(浆)中 NAD+含量计算
NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)
2、组织、细菌或细胞中 NAD+含量计算
(1)按样本蛋白浓度计算
NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
NAD+(nmol/g 鲜重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)
(二)NADH 含量的计算

标准条件下的回归曲线为 y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中 y 为△A,x 为 NADH 浓度 nmol/mL
1、血清(浆)中 NADH 含量计算
NADH 含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)
2、组织、细菌或细胞中 NADH 含量计算
(1)按样本蛋白浓度计算
NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
NADH (nmol/g 鲜重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)
V1:加入反应中样本体积,0.02mL;V2:加入提取液体积,2mL;V3:加入血清(浆)体积:0.1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL; W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500 万。

注 意: 检测限为 0.1nmol/mL 或 0.1nmol/g 鲜重 或 0.001nmol/mg prot