土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(S-NAG)活性检测试剂盒说明书
货号:DM-W-S-NAG
规格:100T/48S 产品内容:
试剂一:液体30mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前加入2mL丙酮溶解,用不完的试剂仍-20℃保存; 试剂三:液体30mL×1 瓶,4℃保存;
标准品:液体1mL×1支,5 mmol/L的对硝基苯酚溶液,4℃保存。临用前用试剂一将标准品稀释50倍得100μmol/L 的标准溶液。
土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(S-NAG)是土壤微生物分泌的溶酶体中的一种酸性水解酶。其活性变化与机体某些病理状态密切相关。
S-NAG分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算NAG活性。
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰、30-50目筛(或更小)和蒸馏水。
一、样本处理:
新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干,过30-50目筛。二、测定步骤:
(1) 分光光度计/酶标仪预热30min,波长调至400nm,蒸馏水调零。
(2) 加样表:
试剂名称
测定管
对照管
标准管
空白管
风干土样(g)
0.03
0.03
-
-
试剂一(μL)
165
165
-
-
试剂二(μL)
15
-
-
-
混匀,37℃水浴1h 后,立即沸水浴5min(盖紧, 防止水分散失),流水/冰浴冷却。
-
-
试剂二(μL)
-
15
-
-
12000g 25℃离心10min,取上清液
-
-
上清液(μL)
100
100
-
-
标准品(μL)
-
-
100
-
蒸馏水(μL)
-
-
100
试剂三(μL)
200
200
200
200
室温静置2min 后,10000g 常温离心5min,吸取200μL上清于微量玻璃比色皿或直接在96孔板中,测定400nm处的吸光值A。分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管。计算ΔA=A 测定管-A对照管,ΔA标准=A标准管-A 空白管。每个测定管设一个对照管。
单位的定义:每天每g土样中产生1 μmol 对硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
S-NAG活力(U/g 土样)=ΔA÷ (ΔA标准÷C标准)×V 反总÷W÷T =0.432× ΔA÷ ΔA标准÷W。T: 反应时间,1h=1/24d;V 反总:反应体系总体积:1.8×10-4 L;C标准:标准溶液浓度,100μmol/L;
W:样本质量。
1、当ΔA 大于 1 时,建议将上清液稀释后进行测定;当ΔA 小于 0.02 时,建议延长反应时间。计算公式中注意乘以稀释倍数或注意反应时间变化。
本产品仅供科学研究使用!请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途! 第 2 页 共 2 页
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
微量法
产品说明:
自备实验用品及仪器:
操作步骤:
三、S-NAG 活力计算:
注意事项:
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土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(S-NAG)活性检测试剂盒 稳定性强 6特异性强 灵敏度高
来源:[上海笃玛生物科技有限公司]
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产品型号:96T/48T