RDelisa试剂盒原理:

  采用双抗体夹心法测定人雄结合蛋白（ABP）水平。用纯化的人雄结合蛋白（ABP）抗体包被微孔板，制成固相载体，实验时依次在微孔板中加入样本及标准品，并加入HRP标记的ABP抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，反复洗涤后加底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化为蓝色，再用硫酸终止反应，转变成黄色。颜色的深浅和样品中的ABP含量呈正相关。采用酶标仪在450nm波长测定吸光度（OD值），根据标准曲线，计算测试样品中ABP浓度。

  实验材料与试剂配制：

  1.仪器与材料：酶标仪（使用前预热30分钟），微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水，滤纸。

  2.缓冲液使用：加5ul的缓冲液于50ul的样品中，如果样品量不够或者不确定，缓冲液和样品的混合比例不要小于1:10即可。

  混匀，静置1小时备用（如果标本是血清或者血浆，此步骤忽略）。

  3.洗液的配制：按1:100的比例配制洗液备用。

  样品收集、处理及保存

  1.细胞培养上清：适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集细胞上清液，以1000×g离心15分钟，收集上清。

  2.细胞：用PBS反复洗涤细胞3次，调整细胞浓度达到104

  -106

  /ml左右，通过反复冻融，使细胞破坏并放出细胞内成份，或

  者细胞超声粉碎，离心取上清液检测。

  3.血清：在室温下，血液自然凝固，以1000×g离心15分钟，取上清待测。

  4.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合后静置10-20分钟后，以1000×g离心15分钟，收集上

  清。

  5.体液：包括胸腹水、脑脊液，分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集，以1000×g离心15分钟，收集上清。

  6.组织标本：切取组织标本，称取重量0.5mg，加入500ul的PBS，用手工或匀浆器，或超声破碎仪将标本匀浆，以2000-3000

  rmp离心20分钟，收集上清进行检测。

  7.样品中不能含有NaN3，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

  8.保存：如果样品不能立即检测，应将其分装，-70℃保存，避免反复冷冻。保存过程中如出现沉淀，应再次离心。血液标本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

更多：RD elisa试剂盒
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